Eskerrik asko Nature.com bisitatzeagatik. Erabiltzen ari zaren nabigatzailearen bertsioak CSS euskarri mugatua du. Emaitza onenak lortzeko, gomendatzen dizugu zure nabigatzailearen bertsio berriago bat erabiltzea (edo Internet Explorer-en bateragarritasun modua desgaitzea). Bitartean, etengabeko laguntza bermatzeko, gunea estilo edo JavaScript gabe erakusten ari gara.
Landareetatik eratorritako intsektizida konposatuen konbinazioek elkarrekintza sinergikoak edo antagonikoak erakuts ditzakete izurriteen aurka. Aedes eltxoek daramatzaten gaixotasunen hedapen azkarra eta Aedes eltxoen populazioek intsektizida tradizionalen aurrean duten erresistentzia gero eta handiagoa kontuan hartuta, landare-olio esentzialetan oinarritutako hogeita zortzi terpeno konposatu konbinazio formulatu eta Aedes aegypti-ren larba eta helduen faseen aurka probatu ziren. Hasieran, bost landare-olio esentzial (EO) ebaluatu ziren haien larba-eraginkortasuna eta helduen erabilerarako eraginkortasuna, eta bi konposatu nagusi identifikatu ziren EO bakoitzean GC-MS emaitzen arabera. Identifikatutako konposatu nagusiak erosi ziren, hots, dialil disulfuroa, dialil trisulfuroa, karbonoa, limonenoa, eugenola, metil eugenola, eukaliptola, eudesmola eta eltxoen alfa-pinenoa. Ondoren, konposatu hauen konbinazio bitarrak prestatu ziren dosi subhilgarriak erabiliz, eta haien efektu sinergikoak eta antagonikoak probatu eta zehaztu ziren. Larbizida-konposizio onenak limonenoa dialil disulfuroarekin nahastuz lortzen dira, eta helduentzako konposizio onenak karvona limonenoarekin nahastuz. Komertzialki erabiltzen den Tempphos larbizida sintetikoa eta Malathion helduentzako sendagaia bereizita eta terpenoideekin konbinazio bitarretan probatu ziren. Emaitzek erakutsi zuten temefos eta dialil disulfuroaren eta malatioiaren eta eudesmolaren konbinazioa zela konbinazio eraginkorrena. Konbinazio indartsu hauek Aedes aegypti-ren aurka erabiltzeko potentziala dute.
Landare-olio esentzialak (EO) konposatu bioaktibo ugari dituzten metabolito sekundarioak dira, eta gero eta garrantzitsuagoak dira pestizida sintetikoen alternatiba gisa. Ingurumena errespetatzen dutenak eta erabilerrazak izateaz gain, konposatu bioaktibo desberdinen nahasketa ere badira, eta horrek erresistentzia garatzeko probabilitatea murrizten du1. GC-MS teknologia erabiliz, ikertzaileek landare-olio esentzial desberdinen osagaiak aztertu zituzten eta 17.500 landare aromatikotatik 3.000 konposatu baino gehiago identifikatu zituzten2, gehienak propietate intsektizidak aztertzeko probatu ziren eta efektu intsektizidak dituztela jakinarazi da3,4. Ikerketa batzuek azpimarratzen dute konposatuaren osagai nagusiaren toxikotasuna etileno oxido gordinaren berdina edo handiagoa dela. Baina konposatu indibidualen erabilerak erresistentzia garatzeko aukera utz dezake berriro ere, intsektizida kimikoekin gertatzen den bezala5,6. Hori dela eta, egungo arreta etileno oxidoan oinarritutako konposatuen nahasketak prestatzean dago, intsektiziden eraginkortasuna hobetzeko eta izurriteen populazioetan erresistentzia izateko probabilitatea murrizteko. EOetan dauden konposatu aktibo indibidualek efektu sinergikoak edo antagonikoak erakuts ditzakete EOaren jarduera orokorra islatzen duten konbinazioetan, aurreko ikertzaileek egindako ikerketetan ondo azpimarratu den gertaera bat7,8. Bektoreen kontrol programak EOa eta bere osagaiak ere barne hartzen ditu. Olio esentzialen eltxo-zidaren jarduera sakon aztertu da Culex eta Anopheles eltxoetan. Hainbat ikerketek pestizida eraginkorrak garatzen saiatu dira, hainbat landare merkataritzan erabiltzen diren pestizida sintetikoekin konbinatuz, toxikotasun orokorra handitzeko eta albo-ondorioak minimizatzeko9. Baina Aedes aegypti-ren aurkako konposatu horien ikerketak arraroak dira oraindik. Medikuntzako aurrerapenek eta sendagaien eta txertoen garapenak bektore-gaixotasun batzuei aurre egiten lagundu dute. Baina Aedes aegypti eltxoak transmititzen duen birusaren serotipo desberdinen presentziak txertaketa-programen porrota eragin du. Beraz, gaixotasun horiek gertatzen direnean, bektoreen kontrol programak dira gaixotasunaren hedapena saihesteko aukera bakarra. Gaur egungo egoeran, Aedes aegypti-ren kontrola oso garrantzitsua da, hainbat birusen eta haien serotipoen bektore gakoa baita, dengue sukarra, Zika, dengue hemorragikoa, sukar horia eta abar eragiten dituztenak. Aipagarriena da ia Aedes aegypti-k transmititzen dituen gaixotasun bektorial guztien kasuen kopurua urtero handitzen ari dela Egipton eta mundu osoan handitzen ari dela. Beraz, testuinguru honetan, premiazkoa da Aedes aegypti populazioetarako ingurumena errespetatzen duten eta eraginkorrak diren kontrol neurriak garatzea. Zentzu honetan hautagai potentzialak EOak, haien osagai diren konposatuak eta haien konbinazioak dira. Horregatik, ikerketa honek bost landareren (hau da, menda, albahaka santua, eukalipto orbanduna, Allium sulfuroa eta melaleuca) landare-EO konposatu gakoen konbinazio sinergiko eraginkorrak identifikatzen saiatu zen Aedes aegypti-ren aurka.
Hautatutako EO guztiek Aedes aegypti-ren aurkako larbizida-jarduera potentziala erakutsi zuten, 24 orduko LC50arekin, 0,42 eta 163,65 ppm artekoa. Larbizida-jarduera handiena pipermin-menta (Mp) EO-rentzat erregistratu zen, 0,42 ppm-ko LC50 balioarekin 24 ordutan, eta ondoren baratxuria (As) etorri zen, 16,19 ppm-ko LC50 balioarekin 24 ordutan (1. taula).
Ocimum Sainttum, Os EO izan ezik, bahetutako beste lau EO guztiek alergia-ondorio nabariak erakutsi zituzten, LC50 balioak 23,37 eta 120,16 ppm bitartekoak izanik 24 orduko esposizio-aldian. Thymophilus striata (Cl) EO izan zen eraginkorrena helduak hiltzeko, 23,37 ppm-ko LC50 balioarekin esposizioaren 24 orduko epean, eta ondoren Eucalyptus maculata (Em) etorri zen, 101,91 ppm-ko LC50 balioarekin (1. taula). Bestalde, Os-ren LC50 balioa ez da oraindik zehaztu, % 53ko hilkortasun-tasa altuena dosirik altuenean erregistratu baitzen (3. irudi osagarria).
EO bakoitzeko bi konposatu osagai nagusiak identifikatu eta hautatu ziren NIST liburutegiaren datu-basearen emaitzen, GC kromatogramaren azalera ehunekoaren eta MS espektroen emaitzen arabera (2. taula). EO As-rentzat, identifikatutako konposatu nagusiak dialil disulfuroa eta dialil trisulfuroa izan ziren; EO Mp-rentzat, identifikatutako konposatu nagusiak karbonoa eta limonenoa izan ziren; EO Em-rentzat, identifikatutako konposatu nagusiak eudesmola eta eukaliptola; EO Os-rentzat, identifikatutako konposatu nagusiak eugenola eta metil eugenola izan ziren, eta EO Cl-rentzat, identifikatutako konposatu nagusiak eugenola eta α-pinenoa izan ziren (1. irudia, 5-8 irudi osagarriak, 1-5 taula osagarria).
Hautatutako olio esentzialen terpenoide nagusien masa-espektrometriaren emaitzak (A-dialil disulfuroa; B-dialil trisulfuroa; C-eugenola; D-metil eugenola; E-limonenoa; F-zeperona aromatikoa; G-α-pinenoa; H-zineola; R-eudamola).
Guztira bederatzi konposatu (dialil disulfuroa, dialil trisulfuroa, eugenola, metil eugenola, karvona, limonenoa, eukaliptola, eudesmola, α-pinenoa) identifikatu ziren EOren osagai nagusiak diren konposatu eraginkor gisa, eta banan-banan bioanalisi egin ziren Aedes aegypti-ren aurka larba-faseetan. Eudesmol konposatuak izan zuen larbizida-jarduera handiena, 2,25 ppm-ko LC50 balioarekin, 24 orduko esposizioaren ondoren. Dialil disulfuroa eta dialil trisulfuroa konposatuek ere larbizida-efektu potentzialak dituztela ikusi da, batez besteko dosi subletalak 10-20 ppm-ko tartean izanik. Larbizida-jarduera moderatua berriro ikusi zen eugenola, limonenoa eta eukaliptola konposatuentzat, 63,35 ppm, 139,29 ppm eta 181,33 ppm-ko LC50 balioekin, hurrenez hurren, 24 ordu igaro ondoren (3. taula). Hala ere, metil eugenolaren eta karbonaren larbizida potentzial esanguratsurik ez zen aurkitu dosi altuenetan ere, beraz, ez ziren LC50 balioak kalkulatu (3. taula). Temephos larbizida sintetikoak 0,43 ppm-ko batez besteko kontzentrazio hilgarria izan zuen Aedes aegypti-ren aurka 24 orduko esposizioan (3. taula, 6. taula osagarria).
Zazpi konposatu (dialil disulfuroa, dialil trisulfuroa, eukaliptola, α-pinenoa, eudesmola, limonenoa eta karvona) identifikatu ziren EO eraginkorraren konposatu nagusi gisa eta banan-banan probatu ziren helduen Aedes eltxo egiptoarren aurka. Probit erregresio-analisiaren arabera, Eudesmolak izan zuen potentzial handiena, 1,82 ppm-ko LC50 balioarekin, eta ondoren Eukaliptolak etorri zen, 17,60 ppm-ko LC50 balioarekin 24 orduko esposizio-denboran. Probatutako gainerako bost konposatuak neurriz kaltegarriak izan ziren helduentzat, 140,79 eta 737,01 ppm arteko LC50ekin (3. taula). Malathion organofosforatu sintetikoa eudesmola baino indartsuagoa izan zen eta beste sei konposatuak baino handiagoa, 5,44 ppm-ko LC50 balioarekin 24 orduko esposizio-aldian (3. taula, 6. taula osagarria).
Zazpi konposatu potentzial nagusi eta organofosforo tamefosatoa hautatu ziren LC50 dosien konbinazio bitarrak 1:1 proportzioan formulatzeko. Guztira 28 konbinazio bitar prestatu eta Aedes aegypti-ren aurkako larbizida eraginkortasuna probatu zen. Bederatzi konbinazio sinergikoak zirela ikusi zen, 14 antagonikoak ziren eta bost ez ziren larbizida. Konbinazio sinergikoen artean, dialil disulfuroaren eta temofolaren konbinazioa izan zen eraginkorrena, % 100eko hilkortasuna ikusi baitzen 24 ordu igaro ondoren (4. taula). Era berean, limonenoaren eta dialil disulfuroaren eta eugenolaren eta timetfosaren nahasketek potentzial ona erakutsi zuten, % 98,3ko larben hilkortasunarekin (5. taula). Gainerako 4 konbinazioek, hots, eudesmol gehi eukaliptola, eudesmol gehi limonenoa, eukaliptola gehi alfa-pinenoa, alfa-pinenoa gehi temefosa, ere larbizida eraginkortasun esanguratsua erakutsi zuten, % 90etik gorako hilkortasun-tasak ikusi baitziren. Espero den hilkortasun-tasa % 60-75etik gertu dago (4. taula). Hala ere, limonenoa α-pinenoarekin edo eukaliptoarekin konbinatzeak erreakzio antagonikoak erakutsi zituen. Era berean, Temephos eugenolarekin edo eukaliptoarekin edo eudesmolarekin edo dialil trisulfuroarekin nahasteek efektu antagonikoak dituztela ikusi da. Era berean, dialil disulfuroaren eta dialil trisulfuroaren konbinazioak eta konposatu horietako edozein eudesmolarekin edo eugenolarekin konbinatzeak antagonikoak dira beren ekintza larbizidari dagokionez. Antagonismoa ere jakinarazi da eudesmolaren eta eugenolaren edo α-pinenoaren konbinazioarekin.
Helduen azidotasun-jarduera aztertutako 28 nahasketa binarioetatik, 7 konbinazio sinergikoak izan ziren, 6k ez zuten eraginik izan eta 15 antagonikoak izan ziren. Eudesmolaren eta eukaliptoaren eta limonenoaren eta karbonaren nahasketak beste konbinazio sinergikoak baino eraginkorragoak zirela ikusi zen, 24 ordutan % 76ko eta % 100eko hilkortasun-tasekin, hurrenez hurren (5. taula). Malatioiak efektu sinergikoa erakusten duela ikusi da konposatu guztien konbinazioekin, limonenoa eta dialil trisulfuroa izan ezik. Bestalde, antagonismoa aurkitu da dialil disulfuroaren eta dialil trisulfuroaren artean eta horietako edozein eukaliptoarekin, edo eukaliptolarekin, edo karbonarekin edo limonenoarekin konbinatzean. Era berean, α-pinenoaren eta eudesmolaren edo limonenoaren, eukaliptolaren eta karbonaren edo limonenoaren konbinazioek eta limonenoaren eta eudesmolaren edo malatioiaren konbinazioek efektu larbizida antagonikoak erakutsi zituzten. Gainerako sei konbinazioetan, ez zegoen desberdintasun esanguratsurik espero zen eta behatutako hilkortasunaren artean (5. taula).
Efektu sinergikoetan eta dosi subhilgarrietan oinarrituta, azkenean Aedes aegypti eltxo kopuru handi baten aurkako larbizida toxikotasuna hautatu eta gehiago probatu zen. Emaitzek erakutsi zuten eugenol-limoneno, dialil disulfuro-limoneno eta dialil disulfuro-timefos konbinazio bitarrak erabiliz larben hilkortasuna % 100ekoa zela, eta espero zen larben hilkortasuna, berriz, % 76,48, % 72,16 eta % 63,4koa zela, hurrenez hurren (6. taula). Limonenoaren eta eudesmolaren konbinazioa nahiko eraginkorra ez zen izan, % 88ko larben hilkortasuna ikusi baitzen 24 orduko esposizio-aldian (6. taula). Laburbilduz, hautatutako lau konbinazio bitarren bidez ere efektu sinergikoak erakutsi ziren Aedes aegypti-ren aurka eskala handian aplikatu zirenean (6. taula).
Hiru konbinazio sinergiko hautatu ziren Aedes aegypti helduen populazio handiak kontrolatzeko adultozida bioanalisirako. Intsektu kolonia handietan probatzeko konbinazioak hautatzeko, lehenik eta behin bi terpeno konbinazio sinergiko onenetan zentratu ginen, hots, karvona gehi limonenoa eta eukaliptola gehi eudesmola. Bigarrenik, konbinazio sinergiko onena malatioi organofosfato sintetikoaren eta terpenoideen konbinaziotik hautatu zen. Uste dugu malatioi eta eudesmolaren konbinazioa dela intsektu kolonia handietan probatzeko konbinaziorik onena, behatutako hilkortasun handiena eta osagai hautagaien LC50 balio oso baxuak direla eta. Malatioiak sinergia erakusten du α-pinenoarekin, dialil disulfuroarekin, eukaliptoarekin, karvonarekin eta eudesmolarekin konbinatuta. Baina LC50 balioei erreparatzen badiegu, Eudesmolak du baliorik baxuena (2,25 ppm). Malatioiaren, α-pinenoaren, dialil disulfuroaren, eukaliptolaren eta karbonaren LC50 balio kalkulatuak 5,4, 716,55, 166,02, 17,6 eta 140,79 ppm izan ziren, hurrenez hurren. Balio hauek adierazten dute malatioiaren eta eudesmolaren konbinazioa dela dosiaren aldetik konbinazio optimoa. Emaitzek erakutsi zuten karvona gehi limonenoaren eta eudesmolarekin eta malatioiarekin konbinazioek % 100eko hilkortasun behatua izan zutela, % 61etik % 65era bitarteko hilkortasun esperoarekin alderatuta. Beste konbinazio batek, eudesmolarekin eta eukaliptolarekin, % 78,66ko hilkortasun-tasa erakutsi zuen esposizioaren 24 ordu igaro ondoren, % 60ko hilkortasun-tasa esperoarekin alderatuta. Hautatutako hiru konbinazioek efektu sinergikoak erakutsi zituzten, Aedes aegypti helduen aurka eskala handian aplikatuta ere (6. taula).
Ikerketa honetan, hautatutako landare-EOek, hala nola Mp, As, Os, Em eta Cl-k, Aedes aegypti-ren larba eta helduen faseetan eragin hilgarri itxaropentsuak erakutsi zituzten. Mp EOak izan zuen larbizida-jarduera handiena, 0,42 ppm-ko LC50 balioarekin, eta ondoren As, Os eta Em EOak etorri ziren, 50 ppm baino gutxiagoko LC50 balioarekin 24 ordu igaro ondoren. Emaitza hauek bat datoz eltxoen eta beste diptero euli batzuen aurreko ikerketekin10,11,12,13,14. Cl-ren larbizida-potentzia beste olio esentzialenak baino txikiagoa den arren, 163,65 ppm-ko LC50 balioarekin 24 ordu igaro ondoren, bere helduen potentziala da altuena, 23,37 ppm-ko LC50 balioarekin 24 ordu igaro ondoren. Mp, As eta Em EOek ere alergia-ahalmen ona erakutsi zuten, LC50 balioekin 100-120 ppm-ko tartean 24 orduko esposizioan, baina haien eraginkortasun larbizida baino nahiko baxuagoak izan ziren. Bestalde, EO Os-ek efektu alergiza hutsala erakutsi zuen dosi terapeutiko altuenean ere. Beraz, emaitzek adierazten dute etileno oxidoak landareetan duen toxikotasuna alda daitekeela eltxoen garapen-fasearen arabera15. EOek intsektuaren gorputzean duten sartze-tasaren, entzima espezifikoekin duten interakzioaren eta eltxoak garapen-fase bakoitzean duen desintoxikazio-ahalmenaren araberakoa ere bada16. Ikerketa askok erakutsi dute osagai nagusia den konposatua faktore garrantzitsua dela etileno oxidoaren jarduera biologikoan, konposatu guztien gehiengoa baita3,12,17,18. Hori dela eta, bi konposatu nagusi hartu ditugu kontuan EO bakoitzean. GC-MS emaitzetan oinarrituta, dialil disulfuroa eta dialil trisulfuroa identifikatu ziren EO As-ren konposatu nagusitzat, aurreko txostenekin bat datorrena19,20,21. Aurreko txostenek mentola bere konposatu nagusietako bat zela adierazten zuten arren, karvona eta limonenoa berriro identifikatu ziren Mp EO-ren konposatu nagusitzat22,23. Os EO-ren konposizio-profilak erakutsi zuen eugenola eta metil eugenola direla konposatu nagusiak, aurreko ikertzaileen aurkikuntzen antzekoa dena16,24. Eukaliptola eta eukaliptola Em hosto-olioan dauden konposatu nagusitzat jo dira, ikertzaile batzuen aurkikuntzekin bat datorrena25,26 baina Olalade et al.-en aurkikuntzen aurkakoa27. Zineola eta α-pinenoaren nagusitasuna ikusi zen melaleuca olio esentzialean, aurreko ikerkuntzen antzekoa dena28,29. Landare-espezie beretik leku desberdinetan ateratako olio esentzialen osaera eta kontzentrazioan espezifiko barruko desberdintasunak jakinarazi dira eta ikerketa honetan ere ikusi dira, landareen hazkuntza-baldintza geografikoek, uzta-garaiak, garapen-faseak edo landareen adinaren, kimiotipoen itxuraren eta abarren eragina dutenak.22,30,31,32. Ondoren, identifikatutako konposatu nagusiak erosi eta larbizida-efektuak eta Aedes aegypti eltxo helduengan dituzten efektuak aztertu ziren. Emaitzek erakutsi zuten dialil disulfuroaren larbizida-jarduera EO As gordinaren parekoa zela. Baina dialil trisulfuroaren jarduera EO As-rena baino handiagoa da. Emaitza hauek Kimbaris et al.-ek 33 Filipinetako Culex-en lortutakoen antzekoak dira. Hala ere, bi konposatu hauek ez zuten jarduera autozida onik erakutsi eltxoen aurka, eta hori bat dator Plata-Rueda et al.-ek 34 Tenebrio molitor-en lortutako emaitzekin. Os EO eraginkorra da Aedes aegypti-ren larba-fasearen aurka, baina ez heldu-fasearen aurka. Konposatu nagusien larbizida-jarduera Os EO gordinarena baino txikiagoa dela frogatu da. Horrek beste konposatu batzuek eta haien elkarrekintzek etileno oxido gordinean duten zeregina inplikatzen du. Metil eugenolak bakarrik jarduera hutsala du, eta eugenolak bakarrik, berriz, larbizida-jarduera moderatua. Ondorio honek, alde batetik, berresten ditu35,36, eta, bestetik, aurreko ikertzaileen ondorioak ezeztatzen ditu37,38. Eugenolaren eta metileugenolaren talde funtzionalen arteko desberdintasunek toxikotasun desberdinak eragin ditzakete intsektu berarentzat39. Limonenoak larbizida-jarduera moderatua duela ikusi da, eta karvonaren eragina, berriz, hutsala da. Era berean, limonenoaren toxikotasun nahiko baxuak intsektu helduentzat eta karvonaren toxikotasun handiak aurreko ikerketa batzuen emaitzak babesten dituzte40, baina beste batzuk ezeztatzen dituzte41. Lotura bikoitzen presentziak, bai posizio intraziklikoetan bai exoziklikoetan, konposatu hauen onurak handitu ditzake larbizida gisa3,41, eta karbonak, alfa eta beta karbono asegabeak dituen zetona bat denak, toxikotasun potentzial handiagoa izan dezake helduengan42. Hala ere, limonenoaren eta karbonaren banakako ezaugarriak EO Mp osoa baino askoz txikiagoak dira (1. taula, 3. taula). Probatu diren terpenoideen artean, eudesmolak larbizida eta helduen jarduera handiena zuela ikusi zen, 2,5 ppm-tik beherako LC50 balioarekin, Aedes eltxoak kontrolatzeko konposatu itxaropentsua bihurtuz. Bere errendimendua EO Em osoarena baino hobea da, nahiz eta hori ez datorren bat Cheng et al.-en aurkikuntzekin40. Eudesmola bi isopreno unitate dituen seskiterpeno bat da, eukaliptoa bezalako monoterpeno oxigenatuak baino lurrunkorragoa dena eta, beraz, pestizida gisa potentzial handiagoa duena. Eukaliptolak berak helduen jarduera larbizida baino handiagoa du, eta aurreko ikerketen emaitzek hau babesten eta gezurtatzen dute37,43,44. Jarduera bera ia konparagarria da EO Cl osoarenarekin. Beste monoterpeno bizikliko batek, α-pinenoak, Aedes aegypti-rengan efektu larbizida baino gutxiago du helduengan, EO Cl osoaren efektuaren kontrakoa dena. Terpenoideen intsektizida-jarduera orokorra haien lipofilitateak, lurrunkortasunak, karbono-adarrak, proiekzio-eremuak, gainazal-eremuak, talde funtzionalek eta haien posizioek eragiten dute45,46. Konposatu hauek zelulen metaketak suntsituz, arnasketa-jarduera blokeatuz, nerbio-bulkadaren transmisioa etenez, etab. jardun dezakete.47 Temephos organofosfato sintetikoak jarduera larbizida handiena zuela ikusi zen, 0,43 ppm-ko LC50 balioarekin, Lek-en datuekin -Utala48 bat datorrena. Malathion organofosforiko sintetikoaren helduen jarduera 5,44 ppm-tan jakinarazi zen. Bi organofosfato hauek Aedes aegypti-ren laborategiko anduien aurka erantzun onuragarriak erakutsi dituzten arren, eltxoen erresistentzia konposatu hauen aurrean munduko leku desberdinetan jakinarazi da49. Hala ere, ez da belar-sendagaien aurkako erresistentziaren garapenari buruzko antzeko txostenik aurkitu50. Beraz, landareak pestizida kimikoen alternatiba potentzial gisa hartzen dira bektoreen kontrol-programetan.
Larbizida-efektua 28 konbinazio bitartan (1:1) probatu zen, terpenoide indartsuetatik eta timetfosarekin prestatutakoetan, eta 9 konbinazio sinergikoak, 14 antagonikoak eta 5 antagonikoak zirela ikusi zen. Efekturik ez. Bestalde, helduen potentzia-bioanalisian, 7 konbinazio sinergikoak zirela ikusi zen, 15 antagonikoak eta 6 konbinaziok ez zutela eraginik izan jakinarazi zen. Konbinazio batzuek efektu sinergikoa sortzen duten arrazoia izan daiteke konposatu hautagaiak bide garrantzitsu desberdinetan aldi berean elkarreragiteagatik, edo bide biologiko jakin bateko entzima gako desberdinen inhibizio sekuentziala51. Limonenoa dialil disulfuroarekin, eukaliptoarekin edo eugenolarekin konbinatzea sinergikoa dela ikusi zen eskala txikiko eta handiko aplikazioetan (6. taula), eta eukaliptoarekin edo α-pinenoarekin konbinatzeak, berriz, larbengan efektu antagonikoak zituela ikusi zen. Batez beste, limonenoa sinergista ona dela dirudi, agian metil taldeen presentziagatik, geruza korneoan ondo sartzen delako eta ekintza-mekanismo desberdin bat duelako52,53. Aurretik jakinarazi da limonenoak efektu toxikoak sor ditzakeela intsektuen kutikulak zeharkatuz (kontaktu-toxikotasuna), digestio-sistemari eraginez (elikaduraren aurkakoa) edo arnas sistemari eraginez (fumigazio-jarduera), 54 eta eugenola bezalako fenilpropanoideek entzima metabolikoei eragin diezaieketela 55. Beraz, ekintza-mekanismo desberdinak dituzten konposatuen konbinazioek nahastearen efektu hilgarri orokorra handitu dezakete. Eukaliptola sinergikoa dela ikusi zen dialil disulfuroarekin, eukaliptoarekin edo α-pinenoarekin, baina beste konposatu batzuekin egindako beste konbinazio batzuk ez-larbizidak edo antagonistak ziren. Hasierako ikerketek erakutsi zuten eukaliptolak azetilkolinesterasaren (AChE) inhibizio-jarduera duela, baita oktaamina eta GABA hartzaileengan ere56. Zikliko monoterpenoek, eukaliptolak, eugenolak, etab. ekintza-mekanismo bera izan dezaketenez beren jarduera neurotoxikoaren berdina,57 horrela haien efektu konbinatuak minimizatzen dira elkarrekiko inhibizioaren bidez. Era berean, Temephos-en eta dialil disulfuroaren, α-pinenoaren eta limonenoaren konbinazioa sinergikoa dela ikusi da, belar-produktuen eta organofosfato sintetikoen arteko efektu sinergikoaren aurreko txostenak babestuz58.
Eudesmol eta eukaliptolaren konbinazioak Aedes aegypti-ren larba eta helduen faseetan efektu sinergikoa duela ikusi da, ziurrenik haien ekintza-modu desberdinak direla eta, haien egitura kimiko desberdinek eraginda. Eudesmolak (seskiterpeno bat) arnas sisteman eragina izan dezake 59 eta eukaliptolak (monoterpeno bat) azetilkolinesterasan 60. Osagaiak bi helburu-gune edo gehiagotan aldi berean jartzeak konbinazioaren efektu hilgarri orokorra areagotu dezake. Substantzien helduen biosaiakuntzetan, malatioia sinergikoa dela ikusi da karbonarekin, eukaliptolarekin, eukaliptolarekin, dialil disulfuroarekin edo α-pinenoarekin, eta horrek adierazten du sinergia duela limonenoa eta di gehitzean. Alergikoen hautagai sinergiko onak dira terpeno konposatuen zorro osoarentzat, alil trisulfuroa izan ezik. Thangam eta Kathiresan61-ek ere malatioiaren eta belar-estraktuen arteko efektu sinergikoaren antzeko emaitzak jakinarazi zituzten. Erantzun sinergiko hau malatioiaren eta fitokimikoen efektu toxiko konbinatuen ondorio izan daiteke intsektuen desintoxikazio-entzimetan. Malatioia bezalako organofosfatoek, oro har, zitokromo P450 esterasak eta monooxigenasak inhibituz jokatzen dute62,63,64. Beraz, malatioia ekintza-mekanismo hauekin eta ekintza-mekanismo desberdinak dituzten terpenoak konbinatzeak eltxoen gaineko efektu hilgarri orokorra areagotu dezake.
Bestalde, antagonismoak adierazten du hautatutako konposatuak konbinazioan konposatu bakoitza bakarrik baino aktibo gutxiago direla. Konbinazio batzuetan antagonismoaren arrazoia izan daiteke konposatu batek beste konposatuaren portaera aldatzen duela xurgapen-tasa, banaketa, metabolismoa edo iraizketa aldatuz. Lehen ikertzaileek hau kontsideratu zuten sendagaien konbinazioetan antagonismoaren kausa zela. Molekulak Mekanismo posiblea 65. Era berean, antagonismoaren kausa posibleak ekintza-mekanismo antzekoekin erlazionatuta egon daitezke, osagai diren konposatuen lehia hartzaile edo helburu-gune berarentzat. Kasu batzuetan, helburu-proteinaren inhibizio ez-lehiakorra ere gerta daiteke. Ikerketa honetan, bi organosulfuro konposatuek, dialil disulfuroak eta dialil trisulfuroak, efektu antagonikoak erakutsi zituzten, agian helburu-gune berarentzat lehiagatik. Era berean, bi sufre konposatu hauek efektu antagonikoak erakutsi zituzten eta ez zuten inolako eraginik izan eudesmolarekin eta α-pinenoarekin konbinatuta. Eudesmola eta alfa-pinenoa izaera ziklikoak dira, eta dialil disulfuroa eta dialil trisulfuroa, berriz, izaera alifatikoak. Egitura kimikoan oinarrituta, konposatu hauen konbinazioak jarduera hilgarri orokorra handitu beharko luke, haien helburu-guneak normalean desberdinak baitira34,47, baina esperimentalki antagonismoa aurkitu dugu, eta hori konposatu hauek in vivo sistema ezezagun batzuetan duten eginkizunagatik izan daiteke, interakzioaren ondorioz. Era berean, zineola eta α-pinenoaren konbinazioak erantzun antagonikoak sortu zituen, nahiz eta ikertzaileek lehenago jakinarazi zuten bi konposatuek ekintza-helburu desberdinak dituztela47,60. Bi konposatuak monoterpeno ziklikoak direnez, lotura lortzeko lehian egon daitezkeen eta aztertutako bikote konbinazionalen toxikotasun orokorrean eragina izan dezaketen helburu-gune komun batzuk egon daitezke.
LC50 balioetan eta behatutako hilkortasunean oinarrituta, bi terpeno konbinazio sinergiko onenak hautatu ziren, hots, karvona + limoneno eta eukaliptol + eudesmol bikoteak, baita terpenoekin lotutako organofosforo malathion sintetikoa ere. Malathion + Eudesmol konposatuen konbinazio sinergiko optimoa helduen intsektizida bioanalisi batean probatu zen. Intsektu kolonia handiak hartu helburu, konbinazio eraginkor hauek esposizio espazio nahiko handietan banako kopuru handien aurka funtziona dezaketen baieztatzeko. Konbinazio horiek guztiek efektu sinergikoa erakusten dute intsektu multzo handien aurka. Antzeko emaitzak lortu ziren Aedes aegypti larben populazio handien aurka probatutako larbizida konbinazio sinergiko optimo batekin. Beraz, esan daiteke landare EO konposatuen larbizida eta helduzida konbinazio sinergiko eraginkorra hautagai sendoa dela dauden produktu kimiko sintetikoen aurka eta Aedes aegypti populazioak kontrolatzeko erabil daitekeela. Era berean, larbizida sintetikoen edo adultiziden eta terpenoen konbinazio eraginkorrak ere erabil daitezke eltxoei ematen zaizkien timetfos edo malatioi dosiak murrizteko. Konbinazio sinergiko indartsu hauek irtenbideak eman ditzakete Aedes eltxoen erresistentziaren bilakaerari buruzko etorkizuneko ikerketetarako.
Aedes aegypti-ren arrautzak Dibrugarh-eko Eskualdeko Ikerketa Mediko Zentroan, Indiako Ikerketa Mediko Kontseiluan, bildu ziren eta tenperatura kontrolatuan (28 ± 1 °C) eta hezetasunean (% 85 ± % 5) gorde ziren Gauhati Unibertsitateko Zoologia Sailean, baldintza hauetan: Arivoli et al.-ek deskribatu zituzten. Eklosioaren ondoren, larbei larben janaria eman zitzaien (txakur gaileta hautsa eta legamia 3:1 proportzioan) eta helduei % 10eko glukosa disoluzioa. Irten eta hirugarren egunean hasita, eme helduen eltxoei arratoi albinoen odola xurgatzen utzi zitzaien. Busti iragazki-papera uretan edalontzi batean eta jarri arrautzak erruteko kaiolan.
Hautatutako landare-laginak, hots, eukalipto hostoak (Myrtaceae), albahaka santua (Lamiaceae), menda (Lamiaceae), melaleuca (Myrtaceae) eta allium erraboilak (Amaryllidaceae). Guwahati-n bildu eta Gauhati Unibertsitateko Botanika Sailak identifikatu zituen. Bildutako landare-laginak (500 g) hidrodestilazio bidez garbitu ziren Clevenger aparatu bat erabiliz 6 orduz. Ateratako EO beirazko botila garbietan bildu eta 4 °C-tan gorde zen azterketa gehiago egiteko.
Larbizidaren toxikotasuna Osasunaren Mundu Erakundearen prozedura estandar apur bat aldatuak erabiliz aztertu zen 67. Erabili DMSO emultsionatzaile gisa. EO kontzentrazio bakoitza hasieran 100 eta 1000 ppm-tan probatu zen, erreplika bakoitzean 20 larba esposizioan jarriz. Emaitzen arabera, kontzentrazio-tarte bat aplikatu zen eta hilkortasuna ordu 1etik 6 ordura erregistratu zen (ordubeteko tarteetan), eta tratamenduaren ondorengo 24 ordu, 48 ordu eta 72 orduetan. Kontzentrazio subhilgarriak (LC50) esposizioaren 24, 48 eta 72 ordu igaro ondoren zehaztu ziren. Kontzentrazio bakoitza hirukoiztuta aztertu zen, kontrol negatibo batekin (ura bakarrik) eta kontrol positibo batekin (DMSOz tratatutako ura). Pupazioa gertatzen bada eta kontrol-taldeko larben % 10 baino gehiago hiltzen badira, esperimentua errepikatzen da. Kontrol-taldeko hilkortasun-tasa % 5-10 artekoa bada, erabili Abbott-en zuzenketa-formula 68.
Ramar et al.-ek deskribatutako metodoa 69 erabili zen Aedes aegypti-ren aurkako helduen bioanalisi baterako, azetona disolbatzaile gisa erabiliz. EO bakoitza hasieran Aedes aegypti eltxo helduen aurka probatu zen 100 eta 1000 ppm-ko kontzentrazioetan. Prestatutako disoluzio bakoitzetik 2 ml aplikatu Whatman zenbakira. Iragazki-paper zati 1 (12 x 15 cm2-ko tamaina) eta azetona lurruntzen utzi 10 minutuz. 2 ml azetonarekin bakarrik tratatutako iragazki-papera erabili zen kontrol gisa. Azetona lurrundu ondoren, tratatutako iragazki-papera eta kontrol-iragazki-papera hodi zilindriko batean jartzen dira (10 cm-ko sakonera). Odola jaten ez duten hamar eltxo, 3-4 egunekoak, kontzentrazio bakoitzeko hirukoiztuetara transferitu ziren. Aurretiazko proben emaitzetan oinarrituta, hautatutako olioen kontzentrazio desberdinak probatu ziren. Hilkortasuna eltxoak askatu eta ordu 1, 2 ordu, 3 ordu, 4 ordu, 5 ordu, 6 ordu, 24 ordu, 48 ordu eta 72 ordura erregistratu zen. Kalkulatu LC50 balioak 24 ordu, 48 ordu eta 72 orduko esposizio-denboretarako. Kontrol-lotearen hilkortasun-tasa % 20tik gorakoa bada, errepikatu proba osoa. Era berean, kontrol-taldeko hilkortasun-tasa % 5etik gorakoa bada, egokitu tratatutako laginen emaitzak Abbott-en formula68 erabiliz.
Gas kromatografia (Agilent 7890A) eta masa espektrometria (Accu TOF GCv, Jeol) egin ziren hautatutako olio esentzialen konposatu osagaiak aztertzeko. GC-a FID detektagailu batekin eta kapilar zutabe batekin (HP5-MS) hornituta zegoen. Garraiatzaile gasa helioa zen, emaria 1 ml/min-koa zen. GC programak Allium sativum-erako 10:80-1M-8-220-5M-8-270-9M eta Ocimum Sainttum-erako 10:80-3M-8-200-3M-10-275-1M-5 – 280, mendarako 10:80-1M-8-200-5M-8-275-1M-5-280, eukaliptorako 20:60-1M-10-200-3M-30-280, eta gorrirako Mila geruzatarako 10:60-1M-8-220-5M-8-270-3M dira.
EO bakoitzaren konposatu nagusiak GC kromatogramaren eta masa-espektrometriaren emaitzetatik kalkulatutako azalera-ehunekoan oinarrituta identifikatu ziren (NIST 70 estandarren datu-basera erreferentziatuta).
EO bakoitzeko bi konposatu nagusiak GC-MS emaitzen arabera hautatu ziren eta Sigma-Aldrich-etik erosi ziren % 98-99ko purutasunean bioanalisi gehiago egiteko. Konposatuen larbizida eta helduen eraginkortasuna Aedes aegypti-ren aurka probatu ziren, goian deskribatu bezala. Tamefosato larbizida sintetiko erabilienak (Sigma Aldrich) eta malatioi helduen sendagaia (Sigma Aldrich) aztertu ziren haien eraginkortasuna hautatutako EO konposatuekin alderatzeko, prozedura bera jarraituz.
Hautatutako terpeno konposatuen eta terpeno konposatuen nahasketa bitarrak, organofosfato komertzialekin (tilefos eta malatioia) batera prestatu ziren konposatu hautagai bakoitzaren LC50 dosia 1:1 proportzioan nahastuz. Prestatutako konbinazioak Aedes aegypti-ren larba eta helduen faseetan probatu ziren, goian deskribatu bezala. Bioanalisi bakoitza hirukoiztuta egin zen konbinazio bakoitzerako eta hirukoiztuta konbinazio bakoitzean zeuden konposatu indibidualetarako. Intsektu helburuen heriotza 24 ordu igaro ondoren erregistratu zen. Kalkulatu nahasketa bitar baten espero den hilkortasun-tasa formula hau erabiliz.
non E = Aedes aegypti eltxoen espero den hilkortasun-tasa konbinazio bitar bati erantzunez, hau da, (A + B) konexioari.
Nahaste bitar bakoitzaren efektua sinergikoa, antagonikoa edo efekturik gabekoa izan zen, Pavla52-k deskribatutako metodoaren bidez kalkulatutako χ2 balioaren arabera. Kalkulatu konbinazio bakoitzerako χ2 balioa formula hau erabiliz.
Konbinazio baten eragina sinergikotzat jo zen kalkulatutako χ2 balioa dagokien askatasun-graduetarako taulako balioa baino handiagoa zenean (% 95eko konfiantza-tartea) eta behatutako hilkortasuna espero den hilkortasuna baino handiagoa zela ikusi zenean. Era berean, edozein konbinaziotarako kalkulatutako χ2 balioa taulako balioa gainditzen badu askatasun-gradu batzuekin, baina behatutako hilkortasuna espero den hilkortasuna baino txikiagoa bada, tratamendua antagonikotzat jotzen da. Eta edozein konbinaziotan kalkulatutako χ2 balioa dagokion askatasun-graduetan taulako balioa baino txikiagoa bada, konbinazioak ez duela eraginik hartzen da.
Hiru edo lau konbinazio sinergiko potentzial (100 larba eta 50 intsektu larbizida eta helduen jarduera) hautatu ziren intsektu kopuru handi baten aurka probatzeko. Helduak) goian bezala jarraitu. Nahasketekin batera, hautatutako nahasteetan zeuden konposatu indibidualak ere Aedes aegypti larba eta heldu kopuru berdinean probatu ziren. Konbinazio-erlazioa konposatu hautagai baten LC50 dosi zati bat eta beste konposatu osagaiaren LC50 dosi zati bat da. Helduen jardueraren bioanalisian, hautatutako konposatuak azetona disolbatzailean disolbatu eta 1300 cm3-ko plastikozko ontzi zilindriko batean bildutako iragazki-paperean aplikatu ziren. Azetona 10 minutuz lurrundu zen eta helduak askatu ziren. Era berean, larbizidaren bioanalisian, LC50 konposatu hautagaien dosiak lehenik DMSO bolumen berdinetan disolbatu ziren eta ondoren 1300 cc-ko plastikozko ontzietan gordetako litro 1 urarekin nahastu ziren, eta larbak askatu ziren.
71 hilkortasun-datu erregistratuen probabilitate-analisia SPSS (16 bertsioa) eta Minitab softwarea erabiliz egin zen LC50 balioak kalkulatzeko.
Argitaratze data: 2024ko uztailak 1