Pestizida sintetikoen erabilera hedatuak arazo asko ekarri ditu, besteak beste, organismo erresistenteen agerpena, ingurumenaren narriadura eta giza osasunerako kalteak.Hori dela eta, premiazkoa da gizakien osasunerako eta ingurumenerako seguruak diren mikrobio-pestizida berriak.Ikerketa honetan, Enterobacter cloacae SJ2-k ekoitzitako rhamnolipido biosurfaktantea erabili da eltxoen (Culex quinquefasciatus) eta termitaren (Odontotermes obesus) larbekiko toxikotasuna ebaluatzeko.Emaitzek erakutsi zuten dosiaren araberako heriotza-tasa zegoela tratamenduen artean.LC50 (% 50eko kontzentrazio hilgarria) balioa 48 ordutan termita eta eltxo larba biosurfaktanteentzat erregresio ez-linealaren kurba egokitzeko metodo baten bidez zehaztu zen.Emaitzek erakutsi zuten 48 orduko LC50 balioak (% 95eko konfiantza-tartea) biosurfaktantaren jarduera larbizida eta antitermiten jardueraren 26,49 mg/L (25,40 eta 27,57 arteko tartea) eta 33,43 mg/L (31,09 eta 35,68 arteko tartea) izan zirela hurrenez hurren.Azterketa histopatologikoaren arabera, biosurfaktantekin tratamenduak kalte larriak eragin zituen larben eta termitaren organulu-ehunetan.Ikerketa honen emaitzek adierazten dute Enterobacter cloacae SJ2k ekoitzitako biosurfaktante mikrobiarra Cx kontrolatzeko tresna bikaina eta potentzialki eraginkorra dela.quinquefasciatus eta O. obesus.
Herrialde tropikalek eltxoek eragindako gaixotasun ugari jasaten dituzte1.Eltxoek eragindako gaixotasunen garrantzia oso zabalduta dago.Urtero 400.000 pertsona baino gehiago hiltzen dira paludismoaren ondorioz, eta hiri handi batzuek gaixotasun larrien epidemia jasaten ari dira, hala nola dengea, sukar horia, chikungunya eta zika.2 Bektoreek transmititzen dituzten gaixotasunak mundu osoan sei infekziotik batekin lotzen dira, eltxoak direlarik gehien eragiten dutenak. kasu esanguratsuak3,4.Culex, Anopheles eta Aedes gaixotasunen transmisioarekin gehien lotzen diren hiru eltxo generoak dira5.Aedes aegypti eltxoak transmititzen duen dengue sukarraren prebalentzia hazi egin da azken hamarkadan eta osasun publikoko mehatxu nabarmena da4,7,8.Osasunaren Mundu Erakundearen (OME) arabera, munduko biztanleriaren % 40 baino gehiago denge sukarra izateko arriskuan dago, eta urtero 50-100 milioi kasu berri gertatzen dira 100 herrialde baino gehiagotan9,10,11.Dengue sukarra osasun publikoko arazo garrantzitsu bat bihurtu da, mundu osoan bere intzidentzia handitu egin baita12,13,14.Anopheles gambiae, Afrikako Anopheles eltxoa izenez ezagutzen dena, giza malariaren bektore garrantzitsuena da eskualde tropikal eta subtropikaletan15.West Nile birusa, San Louis entzefalitisa, japoniar entzefalitisa eta zaldi eta hegaztien infekzio birikoak transmititzen dituzte Culex eltxoek, sarritan etxeko eltxo arruntak deituak.Horrez gain, gaixotasun bakteriano eta parasitoen eramaileak ere badira16.Munduan 3.000 termita espezie baino gehiago daude, eta 150 milioi urte baino gehiago daramatzate17.Izurrite gehienak lurzoruan bizi dira eta zelulosa duten egurrez eta egurrez elikatzen dira.Indiako termita Odontotermes obesus izurrite garrantzitsua da, labore garrantzitsuetan eta landaketetako zuhaitzetan kalte handiak eragiten dituena18.Nekazaritza-eremuetan, hainbat fasetan termiten infestazioek kalte ekonomiko izugarriak eragin ditzakete hainbat labore, zuhaitz espezie eta eraikuntza-materialetan.Termitek gizakien osasun-arazoak ere sor ditzakete19.
Gaur egungo farmazia eta nekazaritza arloetako mikroorganismo eta izurriteen erresistentziaren gaia konplexua da20,21.Hori dela eta, bi enpresek mikrobioen aurkako kostu eraginkorrak eta biopestizida seguru berriak bilatu beharko lituzkete.Pestizida sintetikoak eskuragarri daude orain eta frogatu da infekziosoak direla eta helburu ez diren intsektu onuragarriak uxatzen dituela22.Azken urteotan, biosurfaktanteen inguruko ikerketak hedatu egin dira hainbat industriatan duten aplikazioagatik.Biosurfaktanteak oso erabilgarriak eta ezinbestekoak dira nekazaritzan, lurzoruaren berreskurapenean, petrolio-erauzketan, bakterioak eta intsektuak kentzea eta elikagaiak prozesatzeko23,24.Biosurfaktantak edo mikrobio-surfaktanteak kostaldeko habitatetan eta petrolioz kutsatutako eremuetan mikroorganismoek ekoitzitako produktu kimiko biosurfaktanteak dira25,26.Kimikoki eratorritako surfaktanteak eta biosurfaktanteak ingurune naturaletik zuzenean lortzen diren bi mota dira27.Itsas habitatetatik hainbat biosurfaktante lortzen dira28,29.Horregatik, zientzialariak bakterio naturaletan oinarritutako biosurfaktanteak ekoizteko teknologia berriak bilatzen ari dira30,31.Ikerketa horien aurrerapenek frogatzen dute konposatu biologiko hauek ingurumena babesteko duten garrantzia32.Bacillus, Pseudomonas, Rhodococcus, Alcaligenes, Corynebacterium eta bakterio genero hauek ondo aztertutako ordezkariak dira23,33.
Mota askotako biosurfaktanteak daude aplikazio ugarirekin34.Konposatu hauen abantaila esanguratsu bat da horietako batzuek jarduera antibacterial, larbizida eta intsektizida dutela.Horrek esan nahi du nekazaritza, kimika, farmazia eta kosmetika industrian erabil daitezkeela35,36,37,38.Biosurfaktanteak orokorrean biodegradagarriak eta ingurumenerako onuragarriak direnez, izurriteen kudeaketa integratuko programetan erabiltzen dira laboreak babesteko39.Horrela, Enterobacter cloacae SJ2-k ekoitzitako biosurfaktante mikrobioen jarduera larbizida eta antitermiten jarduerari buruzko oinarrizko ezagutzak lortu dira.Hilkortasuna eta aldaketa histologikoak aztertu ditugu rhamnolipid biosurfaktant-en kontzentrazio desberdinen eraginpean.Horrez gain, oso erabilia den Egitura-Jarduera Kuantitatiboa (QSAR) Egitura-Jarduera Ekologikoa (ECOSAR) programa informatikoa ebaluatu dugu, mikroalgen, dafniaren eta arrainen toxikotasun akutua zehazteko.
Azterketa honetan, biosurfaktante araztuen jarduera antitermiten (toxikotasuna) 30 eta 50 mg/ml bitarteko kontzentrazio ezberdinetan (5 mg/ml tarteetan) Indiako termitek, O. obesus eta laugarren espezieak probatu dira. Ebaluatu.Cx instar-eko larbak.Quinquefasciatus eltxoen larbak.Biosurfaktant LC50 kontzentrazioa 48 ordutan O. obesus eta Cx aurka.C. solanacearum.Eltxoen larbak erregresio ez-linealaren kurba egokitzeko metodo baten bidez identifikatu ziren.Emaitzek erakutsi zuten termiten hilkortasuna handitzen zela biosurfaktantaren kontzentrazioa handituz.Emaitzek erakutsi zuten biosurfaktanteak jarduera larbizida (1. irudia) eta termitaren aurkako jarduera (2. irudia) zituela, 48 orduko LC50 balioekin (% 95eko CI) 26,49 mg/L (25,40 eta 27,57) eta 33,43 mg/. l (31.09tik 35.68ra. irudiak), hurrenez hurren (1. taula).Toxikotasun akutuari dagokionez (48 ordu), biosurfaktantea "kaltegarri" gisa sailkatzen da probatutako organismoentzat.Ikerketa honetan ekoitzitako biosurfaktanteak jarduera larbizida bikaina erakutsi zuen, esposizioaren 24-48 orduko epean %100eko hilkortasunarekin.
Kalkulatu jarduera larbizidarako LC50 balioa.Erregresio ez-lineala kurba egokitzea (lerro jarraitua) eta % 95eko konfiantza-tartea (eremu itzaltsua) hilkortasun erlatiborako (%).
Kalkulatu termiten aurkako jardueraren LC50 balioa.Erregresio ez-lineala kurba egokitzea (lerro jarraitua) eta % 95eko konfiantza-tartea (eremu itzaltsua) hilkortasun erlatiborako (%).
Esperimentuaren amaieran, mikroskopioan aldaketa morfologikoak eta anomaliak ikusi ziren.Aldaketa morfologikoak kontrol eta tratatutako taldeetan ikusi ziren 40x handipenarekin.3. Irudian ikusten den bezala, hazkuntza-narriadura biosurfaktanteekin tratatutako larba gehienetan gertatu zen.3a irudiak Cx normal bat erakusten du.quinquefasciatus, 3b irudiak Cx anormal bat erakusten du.Bost nematodo larba eragiten ditu.
Biosurfaktanteen dosi subletalak (LC50) eragina Culex quinquefasciatus larben garapenean.Cx normal baten argi-mikroskopiako irudia (a) 40× handipenean.quinquefasciatus (b) Cx anormala.Bost nematodo larba eragiten ditu.
Ikerketa honetan, tratatutako larben (4. irudia) eta termitei (5. irudia) azterketa histologikoak hainbat anomalia agerian utzi zituen, besteak beste, sabeleko eremuaren murrizketa eta giharrak, geruza epitelialak eta larruazaleko kalteak.heste erdikoa.Histologiak ikerketa honetan erabilitako biosurfaktantaren jarduera inhibitzailearen mekanismoa agerian utzi zuen.
Tratatu gabeko 4. estadioko Cx larben histopatologia.quinquefasciatus larbak (kontrola: (a,b)) eta biosurfaktantarekin tratatua (tratamendua: (c,d)).Geziek tratatutako heste-epitelioa (epi), nukleoak (n) eta muskuluak (mu) adierazten dituzte.Barra = 50 µm.
Tratatu gabeko O. obesus normalaren histopatologia (kontrola: (a,b)) eta tratatutako biosurfaktantaren (tratamendua: (c,d)).Geziek heste-epitelioa (epi) eta muskulua (mu) adierazten dituzte, hurrenez hurren.Barra = 50 µm.
Azterketa honetan, ECOSAR produktu biosurfaktante rhamnolipidoen toxikotasun akutua aurreikusteko erabili da lehen ekoizleentzat (alga berdeak), lehen kontsumitzaileentzat (ur arkakusoak) eta bigarren mailako kontsumitzaileentzat (arraina).Programa honek egitura-jarduera konposatuen eredu kuantitatibo sofistikatuak erabiltzen ditu egitura molekularrean oinarritutako toxikotasuna ebaluatzeko.Ereduak egitura-jarduera (SAR) softwarea erabiltzen du ur-espezieentzako substantzien toxikotasun akutua eta epe luzerako kalkulatzeko.Zehazki, 2. taulan zenbatetsitako batez besteko kontzentrazio hilgarriak (LC50) eta batez besteko kontzentrazio eraginkorrak (EC50) hainbat espezietarako laburbiltzen dira.Susmatutako toxikotasuna lau mailatan sailkatu zen Produktu Kimikoen Sailkapen eta Etiketatze Sistema Harmonizatuaren (3. Taula) erabiliz.
Bektoreek transmititutako gaixotasunen kontrola, batez ere eltxoen eta Aedes eltxoen anduiak.Egiptoarrak, orain lan zaila 40,41,42,43,44,45,46.Kimikoki eskuragarri dauden pestizida batzuk, hala nola piretroideak eta organofosfatoak, zertxobait onuragarriak diren arren, arrisku handiak eragiten dituzte giza osasunerako, diabetesa, ugalketa-nahasteak, nahaste neurologikoak, minbizia eta arnas gaixotasunak barne.Gainera, denboraren poderioz, intsektu hauek haienganako erresistenteak izan daitezke13,43,48.Horrela, kontrol biologikoko neurri eraginkorrak eta ingurumena errespetatzen dutenak eltxoak kontrolatzeko metodo ezagunagoa bihurtuko dira49,50.Benelli51ek iradoki zuen eltxo-bektoreen kontrol goiztiarra hiri-eremuetan eraginkorragoa izango zela, baina ez zuten gomendatu landa-eremuetan larbizidak erabiltzea52.Tom et al-ek 53-ek ere iradoki zuten eltxoak heldu gabeko fasean kontrolatzea estrategia segurua eta sinplea izango zela, kontrol-agenteekiko sentikorragoak direlako 54 .
Andui indartsu batek (Enterobacter cloacae SJ2) biosurfaktanteen ekoizpenak eraginkortasun koherentea eta itxaropentsua erakutsi zuen.Gure aurreko ikerketak jakinarazi zuen Enterobacter cloacae SJ2 biosurfaktantaren ekoizpena optimizatzen duela parametro fisikokimikoak erabiliz26.Haien azterketaren arabera, E. cloacae isolatu potentzial batek biosurfaktanteak ekoizteko baldintza optimoak 36 orduz inkubatzea, 150 rpm-ko asaldura, pH 7,5, 37 °C, gazitasuna 1 ppt, % 2 glukosa karbono iturri gisa, % 1 legamia izan dira. .erauzketa nitrogeno iturri gisa erabili zen 2,61 g/L biosurfaktante lortzeko.Gainera, biosurfaktanteak TLC, FTIR eta MALDI-TOF-MS erabiliz karakterizatu dira.Honek rhamnolipido biosurfaktantea dela baieztatu zuen.Biosurfaktante glikolipidoak beste biosurfaktante mota batzuen klase intentsiboena dira55.Karbohidrato eta lipido zatiez osatuta daude, batez ere gantz-azido kateez.Glikolipidoen artean, ordezkari nagusiak ramnolipidoak eta sophorolipidoak dira56.Ramnolipidoek azido mono‐ edo di‐β‐hidroxidekanoikoarekin lotutako bi ramnosa zati dituzte 57 .Ramnolipidoen erabilera medikuntza eta farmazia industrietan ondo finkatuta dago 58 , azkenaldian pestizida gisa erabiltzeaz gain 59 .
Biosurfaktanteak arnas-sifoiaren eskualde hidrofobikoarekin duen interakzioari esker, ura bere barrunbe estomatikotik igarotzen da, eta horrela larbek ur-ingurunearekin duten kontaktua areagotzen du.Biosurfaktanteen presentziak trakeari ere eragiten dio, zeinaren luzera gainazaletik gertu dagoenez, larbak lurrazalera arakatzea eta arnasa hartzea errazten du.Ondorioz, uraren gainazaleko tentsioa gutxitzen da.Larbak uraren gainazalean lotu ezin direnez, deposituaren hondora erortzen dira, presio hidrostatikoa apurtuz, eta, ondorioz, gehiegizko gastu energetikoa eta itota hiltzen dira38,60.Antzeko emaitzak lortu zituen Ghribi61-ek, non Bacillus subtilis-ek ekoitzitako biosurfaktante batek Ephestia kuehniellaren aurkako jarduera larbizida erakutsi zuen.Era berean, Cxren jarduera larbizida.Dasek eta Mukherjee23-ek lipopeptido ziklikoek quinquefasciatus larbetan duten eragina ere ebaluatu zuten.
Ikerketa honen emaitzak Cx-ren aurkako ramnolipidoen biosurfaktanteen jarduera larbizidari dagozkio.Quinquefasciatus eltxoen hilketa bat dator aurretik argitaratutako emaitzekin.Adibidez, Bacillus generoko hainbat bakterioek ekoitzitako surfaktinan oinarritutako biosurfaktanteak erabiltzen dira.eta Pseudomonas spp.Lehen txosten batzuek64,65,66 Bacillus subtilis-eko lipopeptido biosurfaktanteen larbak hiltzeko jardueraren berri eman zuten.Deepali et al.63-k aurkitu zuen Stenotropomonas maltophiliatik isolatutako rhamnolipid biosurfaktantak jarduera larbizida indartsua zuela 10 mg/L-ko kontzentrazioan.Silva et al.67-k rhamnolipid biosurfaktantaren jarduera larbizida jakinarazi zuen Ae-ren aurka 1 g/L-ko kontzentrazioan.Aedes aegypti.Kanakdande et al.68-k jakinarazi zuen Bacillus subtilis-ek ekoitzitako biosurfaktante lipopeptidikoek hilkortasun orokorra eragin zutela Culex larben eta eukaliptoaren frakzio lipofilikoko termitetan.Era berean, Masendra et al.69 inurri langileak (Cryptotermes cynocephalus Light.) % 61,7ko hilkortasuna jakinarazi zuten E. estraktu gordinaren n -hexano eta EtOAc frakzio lipofiloetan.
Parthipan et al 70ek Bacillus subtilis A1 eta Pseudomonas stutzeri NA3-ek Anopheles Stephensi, Plasmodium malaria parasitoaren bektore baten aurka, ekoitzitako biosurfaktante lipopeptidoen erabilera intsektizidaren berri eman zuten.Larbak eta pupak luzaroago bizirik irauten zutela ikusi zuten, obiposizio-aldi laburragoak izan zirela, antzuak zirela eta biosurfaktante-kontzentrazio ezberdinekin tratatzean bizi-iraupen laburragoa zutela.B. subtilis A1 biosurfaktantaren LC50 balioak 3,58, 4,92, 5,37, 7,10 eta 7,99 mg/L izan ziren larba-egoera desberdinetarako (hau da, larbak I, II, III, IV eta etapa pupae) hurrenez hurren.Alderatuz, Pseudomonas stutzeri NA3-ren larba-etadiko I-IV eta pupal-estadioetarako biosurfaktanteak 2,61, 3,68, 4,48, 5,55 eta 6,99 mg/L izan ziren, hurrenez hurren.Bizirik irauten duten larben eta puparen fenologia atzeratua intsektizida tratamenduek eragindako nahasmendu fisiologiko eta metaboliko nabarmenen ondorioa dela uste da71.
Wickerhamomyces anomalus CCMA 0358 anduiak biosurfaktante bat ekoizten du Aedes eltxoen aurkako %100 larbizida-jarduera duena.aegypti 24 orduko tartea 38 Silva et al-ek jakinarazitakoa baino handiagoa izan zen.Pseudomonas aeruginosatik ekoitzitako biosurfaktante batek ekilore olioa karbono iturri gisa erabiliz larben %100 hiltzen duela frogatu da 48 orduko epean 67 .Abinaya et al.72 eta Pradhan et al.73 ere frogatu zuten Bacillus generoko hainbat isolatuek sortutako surfaktanteen efektu larbizida edo intsektizida.Senthil-Nathan et al-ek aurrez argitaratutako ikerketa batek.Landare-aintziren eraginpean zeuden eltxoen larben %100 hiltzea litekeena dela ikusi zuten.74.
Intsektizidek intsektuen biologian dituzten ondorio azpihilgarriak ebaluatzea ezinbestekoa da izurriteen kudeaketa integratuko programetarako, dosi/kontzentrazio azpihilgarriak ez dituztelako intsektuak hiltzen, baina etorkizuneko belaunaldietan intsektuen populazioak murrizten baitituzte ezaugarri biologikoak apurtuz10.Siqueira et al 75-ek rhamnolipid biosurfaktantaren (300 mg/ml) jarduera larbizida osoa ikusi zuten (% 100eko hilkortasuna) 50 eta 300 mg/ml bitarteko hainbat kontzentraziotan probatu zutenean.Aedes aegypti anduien larba fasea.Heriotzarako denborak eta kontzentrazio subletalak larben biziraupenean eta igeriketa-jardueran duten eragina aztertu zuten.Horrez gain, igeriketa-abiaduraren beherakada ikusi zuten 24-48 ordu biosurfaktantaren kontzentrazio subletalen eraginpean egon ostean (adibidez, 50 mg/mL eta 100 mg/mL).Itxaropen handiko rol azpihilgarriak dituzten pozoiak eraginkorragoak direla uste da jasandako izurriteei kalte ugari eragiteko76.
Gure emaitzen behaketa histologikoek adierazten dute Enterobacter cloacae SJ2-k sortutako biosurfaktanteek eltxoen (Cx. quinquefasciatus) eta termitaren (O. obesus) larben ehunak nabarmen aldatzen dituztela.An-eko albahaka olioaren prestaketek antzeko anomaliak eragin zituzten.gambiaes.s eta An.arabica deskribatu zituen Ocholak77.Kamaraj et al.78k ere anomalia morfologiko berak deskribatu zituzten An.Stephanieren larbak urrezko nanopartikulen eraginpean zeuden.Vasantha-Srinivasan et al.79k ere jakinarazi zuten artzain-poltsaren ezinbesteko olioak Aedes albopictus-en ganbera eta epitelio-geruza kaltetu zituela.Aedes aegypti.Raghavendran et al-ek jakinarazi zuten eltxo-larbak tokiko Penicillium onddo baten 500 mg/ml mizelio-estraktuarekin tratatu zirela.Ae-k kalte histologiko larriak erakusten ditu.aegypti eta Cx.Hilkortasun-tasa 80. Aurretik, Abinaya et al.An-en laugarren faseko larbak aztertu ziren.Stephensi eta Ae.aegypti-k B. licheniformis exopolisakaridoekin tratatutako Aedes aegypti-n aldaketa histologiko ugari aurkitu zituen, besteak beste, zeku gastrikoa, muskulu-atrofia, nerbio-kordoaren ganglioen kaltea eta desantolaketa72.Raghavendran et al.-en arabera, P. daleae-ren mizelio-estraktuarekin tratatu ondoren, probatutako eltxoen erdiko hesteetako zelulek (4. faseko larbak) heste-lumenaren hantura, zelulen arteko edukia gutxitzea eta endekapen nuklearra erakutsi zuten81.Aldaketa histologiko berberak ikusi ziren echinacea hosto-estraktuarekin tratatutako eltxo-larbetan, tratatutako konposatuen potentzial intsektizida adieraziz50.
ECOSAR softwarearen erabilerak nazioartean aintzatespena jaso du82.Egungo ikerketek iradokitzen dute ECOSAR biosurfaktanteek mikroalgekiko (C. vulgaris), arrainekiko eta ur-arkakusoekiko (D. magna) toxikotasun akutua Nazio Batuek definitutako “toxikotasun” kategorian sartzen dela83.ECOSAR ekotoxikotasun-ereduak SAR eta QSAR erabiltzen ditu substantzien toxikotasun akutua eta epe luzerako iragartzeko eta kutsatzaile organikoen toxikotasuna aurreikusteko erabili ohi da82,84.
Paraformaldehidoa, sodio fosfato tampona (pH 7,4) eta ikerketa honetan erabilitako beste produktu kimiko guztiak HiMedia Laboratories-en erosi ziren, India.
Biosurfaktantaren ekoizpena 500 ml-ko Erlenmeyer-eko matrazeetan egin zen, 200 ml Bushnell Haas medio antzua duten % 1 petrolio gordinarekin karbono iturri bakar gisa osatua.Enterobacter cloacae SJ2 (1,4 × 104 CFU/ml) aurrelaborantza bat inokulatu eta astindu orbital batean hazi zen 37 ° C-tan, 200 rpm 7 egunez.Inkubazio epearen ondoren, biosurfaktantea 3400 × g-tan zentrifugatuz atera zen 20 minutuz 4 °C-tan eta ondoriozko gainnatzailea erabili zen baheketa egiteko.Biosurfaktanteen optimizazio-prozedurak eta karakterizazioa aurreko ikerketatik hartu ziren26.
Culex quinquefasciatus larbak Itsas Biologiako Ikerketa Aurreratuen Zentroan (CAS) lortu ziren, Palanchipetai, Tamil Nadu (India).Larbak 27 ± 2 °C-tan eta 12:12ko fotoperiodoan (argia:iluna) ur deionizatuz betetako plastikozko ontzietan hazi ziren.Eltxoen larbei %10eko glukosa-soluzio batez elikatu zitzaien.
Culex quinquefasciatus larbak hobi septiko irekietan eta babestu gabekoetan aurkitu dira.Sailkapen-jarraibide estandarrak erabiltzea laborategian larbak identifikatzeko eta hazteko85.Osasunaren Mundu Erakundearen 86 gomendioen arabera egin ziren larbizidak probak.SH.Quinquefasciatus-en laugarren faseko larbak hodi itxietan bildu ziren 25 ml-ko eta 50 ml-ko taldeetan, haien ahalmenaren bi herenen aire tartearekin.Biosurfaktanta (0-50 mg/ml) hodi bakoitzari banan-banan gehitu eta 25 °C-tan gorde zen.Kontrol-hodiak ura destilatua soilik erabiltzen zuen (50 ml).Hildako larbak inkubazio aldian (12-48 ordu) igerian arrastorik ez zutenak hartzen ziren 87 .Kalkulatu larben hilkortasunaren ehunekoa ekuazioa erabiliz.(1)88.
Odontotermitidae familiak Odontotermes obesus termita indiarra barne hartzen du, Nekazaritza Campuseko (Annamalai Unibertsitatea, India) enbor usteletan aurkitua.Probatu biosurfaktante hau (0-50 mg/ml) prozedura arruntak erabiliz, kaltegarria den zehazteko.30 minutuz aire-fluxu laminarrean lehortu ondoren, Whatman paper-zerrenda bakoitza biosurfaktantarekin estali zen 30, 40 edo 50 mg/ml-ko kontzentrazioan.Aurrez estalitako eta estali gabeko paper-zerrendak probatu eta konparatu ziren Petri plaka baten erdian.Petri plaka bakoitzak hogeita hamar bat termita aktibo ditu O. obesus.Kontrol eta probako termitei paper hezea eman zitzaien elikagai-iturri gisa.Plaka guztiak giro-tenperaturan mantendu ziren inkubazio-aldi osoan.Termitak 12, 24, 36 eta 48 orduren ostean hil ziren89,90.Ondoren, 1. ekuazioa erabili zen biosurfaktante-kontzentrazio ezberdinetan termiten hilkortasunaren ehunekoa kalkulatzeko.(2).
Laginak izotzetan mantendu eta 0,1 M sodio fosfato buffer (pH 7,4) 100 ml zituzten mikrohodietan sartu eta Rajiv Gandhi Akuikultura Zentroko (RGCA) Akuikultura Patologia Laborategi Zentralera (CAPL) bidali ziren.Histologia Laborategia, Sirkali, Mayiladuthurai.Barrutia, Tamil Nadu, India azterketa gehiago egiteko.Laginak berehala finkatu ziren %4ko paraformaldehidoan 37 °C-tan 48 orduz.
Finkatze-fasearen ondoren, materiala hiru aldiz garbitu zen 0,1 M sodio fosfato tamponarekin (pH 7,4), etanoletan deshidratatu eta 7 egunez LEICA erretxinan busti.Ondoren, substantzia erretxinaz eta polimerizatzailez betetako plastikozko molde batean jartzen da, eta, ondoren, 37 °C-tan berotutako labean sartzen da, substantzia duen blokea guztiz polimerizatu arte.
Polimerizazioaren ondoren, blokeak LEICA RM2235 mikrotomo bat erabiliz (Rankin Biomedical Corporation 10.399 Enterprise Dr. Davisburg, MI 48.350, AEB) moztu ziren 3 mm-ko lodieraraino.Atalak diapositibetan multzokatuta daude, diapositiba bakoitzeko sei atal.Diapositibak giro-tenperaturan lehortu ziren, ondoren 7 minutuz hematoxilinarekin tindatu eta ur korrontearekin garbitu 4 minutuz.Horrez gain, aplikatu eosina disoluzioa larruazalean 5 minutuz eta garbitu ur korrontearekin 5 minutuz.
Toxikotasun akutua maila tropikal ezberdinetako ur-organismoak erabiliz aurreikusi zen: 96 orduko arrainak LC50, 48 orduko D. magna LC50 eta 96 orduko alga berdeak EC50.AEBetako Ingurumena Babesteko Agentziak garatu duen Windows-erako ECOSAR softwarearen 2.2 bertsioa erabiliz ebaluatu da rhamnolipid biosurfaktantek arrainekiko eta alga berdeekiko duten toxikotasuna.(Linean eskuragarri dago https://www.epa.gov/tsca-screening-tools/ecological-struct-activity-relationships-ecosar-predictive-model).
Aktibitate larbizida eta antitermitikoaren proba guztiak hirukoiztuta egin ziren.Larba eta termiten hilkortasun datuen erregresio ez-lineala (dosi-erantzunaren aldagaien logaritmoa) egin zen kontzentrazio hilgarriaren mediana (LC50) kalkulatzeko % 95eko konfiantza-tartearekin, eta kontzentrazio-erantzun-kurbak Prism® erabiliz (8.0 bertsioa, GraphPad Software) Inc. erabiliz sortu ziren. AEB) 84, 91.
Ikerketa honek Enterobacter cloacae SJ2-k ekoitzitako biosurfaktante mikrobioen potentziala erakusten du eltxo larbizida eta antitermiten eragile gisa, eta lan honek larbizida eta antitermiten ekintzaren mekanismoak hobeto ulertzen lagunduko du.Biosurfaktantekin tratatutako larben azterketa histologikoek digestio aparatuan, heste erdian, garun-kortexean eta heste-zelulen epitelioen hiperplasian kalteak erakutsi zituzten.Emaitzak: Enterobacter cloacae SJ2-k ekoitzitako rhamnolipid biosurfaktantaren jarduera antitermita eta larbizidaren ebaluazio toxikologikoak agerian utzi du isolatu hau eltxoen (Cx quinquefasciatus) eta termiten (O. obesus) bektoreen gaixotasunak kontrolatzeko balizko biopestizida dela.Biosurfaktanteen ingurumen-toxikotasuna eta haien ingurumen-inpaktu potentzialak ulertu beharra dago.Ikerketa honek oinarri zientifiko bat eskaintzen du biosurfaktanteen ingurumen-arriskua ebaluatzeko.
Argitalpenaren ordua: 2024-09-09