DELLA proteinak nagusi kontserbatuak dirahazkunde-erregulatzaileaklandareen garapena kontrolatzeko funtsezko zeregina dutenak barne eta ingurumen-seinaleei erantzunez. DELLAk transkripzio-erregulatzaile gisa jokatzen du eta sustatzaileetara erakartzen da transkripzio-faktoreei (TF) eta H2A histonari lotuz bere GRAS domeinuaren bidez. Azken ikerketek erakutsi dute DELLAren egonkortasuna translazio osteko bi mekanismoren bidez erregulatzen dela: giberelina fitohormonak eragindako poliubikitinazioa, bere degradazio azkarra eragiten duena, eta ubikitina-antzeko aldatzaile txikien (SUMO) konjugazioa, bere metaketa handitzeko. Gainera, DELLAren jarduera dinamikoki erregulatzen da bi glikosilazio ezberdinen bidez: DELLA-TF elkarrekintza O-fukosilazioak hobetzen du, baina O-lotutako N-azetilglukosamina (O-GlcNAc) aldaketak inhibitzen du. Hala ere, DELLA fosforilazioaren zeregina ez dago argi, aurreko ikerketek emaitza kontrajarriak erakutsi baitituzte, fosforilazioak DELLAren degradazioa sustatzen edo murrizten duela erakusten dutenetatik hasi eta fosforilazioak bere egonkortasunean eragiten ez duela erakusten duten beste batzuetaraino. Hemen, REPRESSOR-en fosforilazio-guneak identifikatzen ditugu.ga1-3(RGA, AtDELLA) Arabidopsis thaliana-tik masa-espektrometria bidez purifikatutakoak erakusten dute bi RGA peptidoen fosforilazioak PolyS eta PolyS/T eskualdeetan H2A lotura sustatzen duela eta RGA jarduera hobetzen duela. RGAren eta sustatzaileen arteko lotura. Azpimarratzekoa da fosforilazioak ez duela eragiten RGA-TF interakzioetan edo RGAren egonkortasunean. Gure ikerketak fosforilazioak DELLA jarduera eragiten duen mekanismo molekularra agerian uzten du.
DELLA funtzioa erregulatzeko fosforilazioak duen eginkizuna argitzeko, ezinbestekoa da DELLA fosforilazio guneak in vivo identifikatzea eta landareetan analisi funtzionalak egitea. Landare-estraktuen afinitate-purifikazioaren eta MS/MS analisiaren bidez, hainbat fosfosito identifikatu genituen RGA-n. GA gabezia-baldintzetan, RHA fosforilazioa handitzen da, baina fosforilazioak ez du bere egonkortasunean eragiten. Garrantzitsua da, ko-IP eta ChIP-qPCR analisiak agerian utzi zuten RGA-ren PolyS/T eskualdeko fosforilazioak H2A-rekin duen interakzioa eta sustatzaileekin duen lotura sustatzen duela, fosforilazioak RGA funtzioa nola eragiten duen agerian utziz.
RGA kromatina helburura errekrutatzen da LHR1 azpidomeinuaren eta TFren arteko elkarreraginaren bidez eta ondoren H2Ari lotzen zaio bere PolyS/T eskualdearen eta PFYRE azpidomeinuaren bidez, H2A-RGA-TF konplexua eratuz RGA egonkortzeko. Pep 2-ren fosforilazioak PolyS/T eskualdean, DELLA domeinuaren eta GRAS domeinuaren artean, kinasa ezezagun batek RGA-H2A lotura hobetzen du. rgam2A proteina mutanteak RGA fosforilazioa ezabatzen du eta proteina konformazio desberdina hartzen du H2A lotura oztopatzeko. Horrek TF-rgam2A interakzio iragankorrak desestabilizatzea eta rgam2A kromatina helburutik disoziatzea eragiten du. Irudi honek RGAk bitartekatutako transkripzio errepresioa soilik erakusten du. Antzeko eredua deskriba liteke RGAk bitartekatutako transkripzio aktibaziorako, baina H2A-RGA-TF konplexuak helburuko geneen transkripzioa sustatuko luke eta rgam2A-ren desfosforilazioak transkripzioa gutxituko luke. Huang et al.21-etik aldatutako irudia.
Datu kuantitatibo guztiak Excel erabiliz aztertu ziren estatistikoki, eta desberdintasun esanguratsuak Student-en t testa erabiliz zehaztu ziren. Ez zen metodo estatistikorik erabili laginaren tamaina aldez aurretik zehazteko. Ez zen daturik baztertu analisitik; esperimentua ez zen ausazkoa izan; ikertzaileek ez zuten itsurik izan esperimentuan zehar datuen banaketari eta emaitzen ebaluazioari buruz. Laginaren tamaina irudiaren legendan eta iturburu-datuen fitxategian adierazten da.
Ikerketaren diseinuari buruzko informazio gehiago lortzeko, ikus artikulu honekin lotutako Natural Portfolio Txostenaren Laburpena.
Espektrometria masiboko proteomikaren datuak ProteomeXchange partzuergoari eman zaizkio PRIDE66 bazkideen biltegiaren bidez, PXD046004 datu-multzoaren identifikadorearekin. Ikerketa honetan zehar lortutako gainerako datu guztiak Informazio Osagarrietan, Datu Osagarrien Fitxategietan eta Datu Gordinen Fitxategietan aurkezten dira. Artikulu honetarako iturburu-datuak ematen dira.
Argitaratze data: 2024ko azaroaren 8a