DELLA proteinak maisu kontserbatuak dirahazkunde-erregulatzaileaklandareen garapena kontrolatzeko zeregin nagusia betetzen dutenak barneko eta ingurumeneko seinaleei erantzunez. DELLA transkripzio-erregulatzaile gisa jarduten du eta sustatzaileei zuzenduta kontratatzen da transkripzio-faktoreekin (TF) eta H2A histonarekin bere GRAS domeinuaren bidez lotuz. Azken ikerketek frogatu dute DELLAren egonkortasuna itzultze osteko bi mekanismoren bidez erregulatzen dela: giberelina fitohormonak eragindako poliubikitinazioa, zeinak degradazio azkarra dakar, eta ubikitina antzeko modifikatzaile txikien (SUMO) konjugazioa, metaketa handitzeko. Horrez gain, DELLAren jarduera bi glikosilazio ezberdinen bidez erregulatzen da dinamikoki: DELLA-TF elkarrekintza O-fukosilazioarekin hobetzen da, baina O-loturiko N-acetilglukosamina (O-GlcNAc) aldaketen bidez inhibitzen da. Dena den, DELLA fosforilazioen eginkizuna ez dago argi, aurreko ikerketek emaitza kontrajarriak erakutsi baitituzte, fosforilazioak DELLA degradazioa sustatzen edo murrizten duela erakusten dutenetatik hasi eta fosforilazioak bere egonkortasunean eragiten ez duela erakusten dutenetatik. Hemen, fosforilazio guneak identifikatzen ditugu REPRESSOR-enga1-3(RGA, AtDELLA) Arabidopsis thalianatik araztutako masa-espektrometriaren analisiaren bidez eta PolyS eta PolyS/T eskualdeetan bi RGA peptidoen fosforilazioak H2A lotura eta RGA jarduera hobetzen duela erakusten du. RGA elkartea xede sustatzaileekin. Nabarmentzekoa, fosforilazioak ez du RGA-TF interakzioetan edo RGA egonkortasunean eragiten. Gure ikerketak fosforilazioak DELLAren jarduera eragiten duen mekanismo molekularra erakusten du.
DELLAren funtzioa erregulatzeko fosforilazioak duen eginkizuna argitzeko, ezinbestekoa da DELLA fosforilazio guneak in vivo identifikatzea eta landareetan analisi funtzionalak egitea. Landare-estraktuen afinitate-arazketaz eta MS/MS analisiaz, hainbat fosfosito identifikatu genituen RGAn. GA gabeziaren baldintzetan, RHA fosforilazioa handitzen da, baina fosforilak ez du bere egonkortasunean eragiten. Garrantzitsuena, co-IP eta ChIP-qPCR saiakerek agerian utzi zuten RGA-ren PolyS/T eskualdeko fosforilazioak H2A-rekin duen interakzioa eta xede-sustatzaileekin elkartzea sustatzen duela, fosforilazioa RGA funtzioa eragiten duen mekanismoa agerian utziz.
RGA kromatina helburutzat hartzen da LHR1 azpidomeinuak TFrekin duen elkarrekintzaren bidez eta, ondoren, H2Arekin lotzen da bere PolyS/T eskualdearen eta PFYRE azpidomeinuaren bidez, H2A-RGA-TF konplexua osatuz RGA egonkortzeko. DELLA domeinuaren eta GRAS domeinuaren arteko PolyS/T eskualdean Pep 2 fosforilatzeak identifikatu gabeko kinasa baten bidez RGA-H2A lotura hobetzen du. rgam2A proteina mutanteak RGA fosforilazioa deuseztatzen du eta proteina konformazio ezberdin bat hartzen du H2A lotura oztopatzeko. Horrek TF-rgam2A interakzio iragankorrak ezegonkortzen ditu eta rgam2A xede-kromatinatik disoziatzen du. Irudi honek RGA bidezko transkripzio-errepresioa baino ez du irudikatzen. RGA bidezko transkripzio-aktibaziorako antzeko eredua deskriba liteke, H2A-RGA-TF konplexuak xede geneen transkripzioa sustatuko lukeela eta rgam2A-ren desfosforilazioak transkripzioa gutxituko lukeela izan ezik. Huang et al.21etik aldatutako irudia.
Datu kuantitatibo guztiak estatistikoki aztertu ziren Excel-en bidez, eta desberdintasun esanguratsuak Student-en t testaren bidez zehaztu ziren. Ez da metodo estatistikorik erabili laginaren tamaina aldez aurretik zehazteko. Ez da daturik baztertu azterketatik; esperimentua ez zen ausazkoa izan; ikertzaileak ez ziren itsu egon esperimentuan zehar datuen banaketa eta emaitzen ebaluazioan. Laginaren tamaina irudiaren legendan eta iturri-datuen fitxategian adierazten da.
Azterketaren diseinuari buruzko informazio gehiago lortzeko, ikusi artikulu honekin lotutako Natural Portfolio txostenaren laburpena.
Masa-espektrometriako proteomikaren datuak ProteomeXchange partzuergoari lagundu zaizkio PRIDE66 bazkideen biltegiaren bidez, PXD046004 datu-multzoaren identifikatzailearekin. Azterlan honetan lortutako gainerako datu guztiak Informazio osagarrian, datu osagarrien fitxategietan eta datu gordinaren fitxategietan aurkezten dira. Iturburu datuak artikulu honetarako ematen dira.
Argitalpenaren ordua: 2024-12-08