DELLA proteinak kontserbatzen dirahazkunde-erregulatzaileaklandareen garapenean zeregin nagusia betetzen dutenak barne eta kanpoko seinaleei erantzuteko. Transkripzio-erregulatzaile gisa, DELLAak transkripzio-faktoreekin (TF) eta histonarekin H2A lotzen dira GRAS domeinuen bidez eta sustatzaileen gainean jarduteko kontratatzen dira. Azken ikerketek frogatu dute DELLA egonkortasuna itzulpenaren osteko bi mekanismoren bidez erregulatzen dela: landare-hormonak eragindako poliubikitinazioa.giberelina, hauen degradazio azkarra dakar, eta ubikitina antzeko modifikatzaile txikiarekin (SUMO) konjugazioa, metaketa handitzen duena. Gainera, DELLAren jarduera bi glikosilazio mekanismo ezberdinen bidez erregulatzen da dinamikoki: O-fukosilazioa DELLA-TF interakzioa hobetzen du, eta O-lotutako N-acetilglukosamina (O-GlcNAc) aldakuntzak DELLA-TF elkarrekintza galarazten du. Hala eta guztiz ere, DELLA fosforilazioen eginkizuna ez dago argi, aurreko ikerketek emaitza kontrajarriak erakutsi baitituzte, batzuek fosforilazioak DELLA degradazioa sustatzen edo erreprimitzen duela iradokitzen dute eta beste batzuek fosforilak ez duela haien egonkortasunean eragiten. Hemen, fosforilazio guneak identifikatzen ditugu GA1-3 errepresiorea (RGA), AtDELLA, Arabidopsis thalianatik masa-espektrometria bidez araztutako eta PolyS eta PolyS/T eskualdeetako bi RGA peptidoen fosforilazioa RGA jarduera hobetzen duela erakusten dugu H2A lotura eta RGA asoziazioa helburu sustatzaileekin sustatuz. Nabarmentzekoa, fosforilazioa ez zuen RGA-TF elkarrekintzan edo RGA egonkortasunean eraginik izan. Gure ikerketak fosforilazioak DELLAren jarduera eragiten duen mekanismo molekular bat erakusten du.
Gure masa-espektrometriako analisiak agerian utzi zuen bai Pep1 eta bai Pep2 oso fosforilatuta zeudela RGAn GA eskaseko Ga1 atzeko planoan. Ikerketa honetaz gain, ikerketa fosfoproteomikoek Pep1 fosforilazioa ere agerian utzi dute RGAn, nahiz eta bere eginkizuna oraindik ikertu ez den53,54,55. Aitzitik, Pep2 fosforilazioa ez da aldez aurretik deskribatu, peptido hau RGAGKG transgenea erabiliz soilik detektatu ahal izan baita. Pep1 fosforilazioa ezabatu zuen m1A mutazioak plantan RGA jarduera apur bat murriztu zuen arren, efektu gehigarria izan zuen m2Arekin konbinatuta RGA jarduera murrizteko (6. irudi osagarria). Garrantzitsuena, Pep1 fosforilazioa nabarmen murriztu zen GA hobetutako sly1 mutantean ga1-arekin alderatuta, GAk RGA desfosforilazioa sustatzen duela iradokitzen du, bere jarduera murriztuz. GAk RGA fosforilazioa kentzen duen mekanismoak ikerketa gehiago behar du. Aukera bat da identifikatu gabeko proteina kinasa baten erregulazioaren bidez lortzen dela. Ikerketek frogatu duten arren CK1 proteina kinasaren EL1 adierazpena GAk arroz41n beherago erregulatzen duela, gure emaitzek adierazten dute Arabidopsis EL1 homologoaren (AEL1-4) maila altuagoko mutazioek ez dutela RGA fosforilazioa murrizten. Gure emaitzekin bat etorriz, Arabidopsis AEL gainadierazpen-lerroak eta ael mutante hirukoitza erabiliz egindako azken azterketa fosfoproteomiko batek ez zuen DELLA proteinarik identifikatu kinasa horien substratu gisa56. Eskuizkribua prestatu genuenean, jakinarazi zen GSK3, garietan GSK3/SHAGY-like kinase bat kodetzen duen genea (Triticum aestivum), DELLA (Rht-B1b)57 fosforila dezakeela, nahiz eta GSK3-ren Rht-B1b-en fosforilazioa plantan baieztatu ez den. GSK3-ren presentziaren in vitro erreakzio entzimatikoek eta masa-espektrometriaren analisiak jarraituta Rht-B1b-ren DELLA eta GRAS domeinuen artean kokatutako hiru fosforilazio gune agerian utzi zituzten (3. irudi osagarria). Hiru fosforilazio guneetan serinaren eta alaninaren ordezkapenek Rht-B1b jarduera gutxitu zuten gari transgenikoan, Pep2 RGAn alanina ordezkapenek RGAren jarduera gutxitu zutela egindako aurkikuntzekin. Hala ere, in vitro proteina degradatzeko saiakerek gehiago frogatu zuten fosforilazioa ere egonkortu daitekeela Rht-B1b57. Hau Pep2 RGAn alanina ordezkapenek ez dutela plantan egonkortasuna aldatzen erakusten duten emaitzekin alderatuta dago. GSK3 garietan brassinosteroideekiko sentikor ez den proteina 2 (BIN2) ortologo bat da Arabidopsis-en 57. BIN2 BR seinaleztapenaren erregulatzaile negatiboa da, eta BR-k bere seinaleztapen-bidea aktibatzen du BIN2 degradazioa eraginez 58. BR tratamenduak ez duela RGA egonkortasuna murrizten 59 edo fosforilazio-mailak iradokitzen du (Supplementation GA2) Arabipsia mailak iradokitzen du. nekez fosforilatuko du BIN2k.
Datu kuantitatibo guztiak estatistikoki aztertu ziren Excel erabiliz, eta desberdintasun esanguratsuak Student-en t-testaren bidez zehaztu ziren. Ez da metodo estatistikorik erabili laginaren tamaina aldez aurretik zehazteko. Ez da daturik baztertu azterketatik; esperimentua ez zen ausazkoa izan; eta ikertzaileek esleipenaren berri izan zuten esperimentuan eta emaitzen ebaluazioan zehar. Lagin-tamainak irudien legendan eta datu gordinaren fitxategietan ematen dira.
Argitalpenaren ordua: 2025-04-15