Landare eta material patogenoak
Sorgo-konbertsio-populazioa (SCP) izenez ezagutzen den sorgo-elkarteen mapa-populazioa Pat Brown doktoreak eman zuen Illinoisko Unibertsitatean (orain UC Davis-en).Aurretik deskribatu da eta fotoperiodo-sentsibilitatean eta altuera txikiagoan bihurtutako hainbat lerrotako bilduma da, AEBetako inguruneetan landareen hazkuntza eta garapena errazteko.Azterketa honetan populazio honetako 510 lerro erabili ziren, nahiz eta ernetze txarragatik eta beste kalitate-kontroleko arazoengatik, lerro guztiak ez ziren erabili hiru ezaugarriak aztertzeko.Azken finean, 345 lerrotako datuak erabili dira kitinaren erantzuna aztertzeko, 472 lerro flg22 erantzunerako eta 456 TLS erresistentziarako.B. cookeiLSLP18 tentsioa Arkansasko Unibertsitateko Burt Bluhm doktorearengandik lortu zen.
MAMP erantzunaren neurketa
Azterketa honetan bi MAMP ezberdin erabili ziren flg22, (Genscript katalogo # RP19986) eta kitina.Sorgo landareak negutegiko lurzoruarekin (% 33 Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) betetako lauetan jarritako txertaketetan hazi ziren.Landareak laginak hartu aurreko egunean ureztatu ziren, bilketa egunean hostoen hezetasun gehigarria ekiditeko.
Lerroak ausaz banatu ziren eta, arrazoi logistikoengatik, 60 lerroko loteetan landatu ziren.Lerro bakoitzeko, hiru "lorre" landatu ziren lerro bakoitzeko bi hazirekin.Ondorengo loteak aurreko lotea prozesatu bezain laster landatzen ziren populazio osoa ebaluatu arte.Bi proba esperimental egin ziren bi MAMPetarako genotipoak berriro ausazkoak dituzten bi lasterketa bakoitzean.
ROS entseguak aurretik deskribatu bezala egin ziren.Laburbilduz, lerro bakoitzeko, sei hazi landatu ziren 3 lorontzi ezberdinetan.Ondorioz, plantuletatik hiru aukeratu ziren uniformetasunaren arabera.Gehienak baino ezohiko itxura zuten edo nabarmen altuagoak edo laburragoak ziren plantulak ez ziren erabili.3 mm-ko diametroko lau hosto-disko moztu ziren 15 eguneko hiru sorgo landare ezberdinen 4. hostoaren zatirik zabalenetik.Bi landaretako hosto bakoitzeko disko bat eta landare bateko bi disko, bigarren diskoa uraren kontrola bihurtuz (ikus behean).Diskoak banan-banan flotatu ziren 50 µl H20 gainean 96 putzuko plaka beltz batean, aluminiozko zigilu batekin zigilatu ziren argiaren eraginpean egon ez zedin, eta giro-tenperaturan mantendu ziren gau osoan.Hurrengo goizean erreakzio-soluzio bat egin zen 2 mg/ml L-012 zunda kimiluminiszentea erabiliz (Wako, katalogo # 120-04891), 2 mg/ml horseradish peroxidasa (VI-A mota, Sigma-Aldrich, katalogo # P6782) eta 100 mg/ml Kitina edo 2 μM Flg22.Erreakzio-soluzio honen 50 µl lau putzuetako hirutan gehitu ziren.Laugarren putzua kontrol simulatua zen, eta horri MAMPa kenduta erreakzio-soluzioa gehitu zitzaion.Plaka bakoitzean ura baino ez zuten lau putzu huts ere sartu ziren.
Erreakzio-soluzioa gehitu ondoren, lumineszentzia SynergyTM 2 detekzio anitzeko mikroplaka irakurgailuaren bidez (BioTek) neurtu zen 2 minuturo 1 orduz.Plaka-irakurleak lumineszentzia-neurketak egiten ditu 2 minuturo 1 ordu honetan zehar.31 irakurketa guztien batura kalkulatu zen putzu bakoitzaren balioa emateko.Genotipo bakoitzeko MAMP erantzunaren balio estimatua honela kalkulatu da (hiru putzu esperimentalen batez besteko lumineszentzia-balioa —putzu itxurako balioa) - putzu hutsaren batez besteko balioa kenduta.Putzu hutsaren balioak zerotik gertu zeuden etengabe.
hosto-diskoakNicotiana benthamiana, erantzun handiko sorgo-lerro bat (SC0003) eta erantzun baxuko sorgo-lerro bat (PI 6069) ere kontrol gisa sartu ziren 96 putzuko plaka bakoitzean kalitate-kontrolerako.
B. cookeiinokuluaren prestaketa eta inokulazioa
B. cookeiinokulua lehen azaldu bezala prestatu zen.Laburbilduz, sorgo aleak hiru egunez uretan busti, garbitu, 1L-ko matraze konikoetan sartu eta ordubetez autoklabetu 15psi eta 121 °C-tan.Ondoren, aleak 5 ml inguru mizelio mazeratuarekin inokulatu ziren, kultura fresko batetikB. cookeiLSLP18 isolatu eta 2 astez utzi du giro-tenperaturan, matrazeak 3 egunetik behin astinduz.2 asteren buruan, onddoak infektatutako sorgo aleak airez lehortu ziren eta, ondoren, 4 °C-tan gorde ziren eremuan inokulatu arte.Inokulu bera erabili zen proba osoan eta urtero fresko egiten zen.Inokulaziorako, infektatutako 6-10 ale jarri ziren 4-5 asteko sorgo landareen kiribiloan.Onddo horietatik sortutako esporek astebeteko epean sorgo-landare gazteetan infekzioa hasi zuten.
Haziak prestatzea
Sorgo-hazia landatu aurretik, ~% 1 Spirato 480 FS fungizida, % 4 Sebring 480 FS fungizida, % 3 Sorpro 940 ES hazien babesgarriarekin tratatu zen.Ondoren, haziak 3 egunez airez lehortu ziren eta horrek nahasketa honen estaldura mehe bat eman zuen hazien inguruan.Segurtzaileak Dual Magnum herbizida erabiltzea ahalbidetu zuen, sorrera aurreko tratamendu gisa.
Helburuko hosto-orbanen erresistentziaren ebaluazioa
SCP Clayton-eko (NC) Central Crops Research Station-en landatu zen 2017ko ekainaren 14tik 15era eta 2018ko ekainaren 20an ausazko blokeen diseinuan, kasu bakoitzean bi erreplika esperimentalekin.Esperimentuak 1,8 m-ko ilara bakarrean landatu dira 0,9 m-ko errenkadaren zabalerarekin, lursail bakoitzeko 10 hazi erabiliz.Esperimentu bakoitzaren periferian bi ertz-lerro landatu ziren ertz-efektuak saihesteko.Esperimentuak 2017ko uztailaren 20an eta 2018ko uztailaren 20an inokulatu ziren. Momentu horretan, sorgo-landareak 3. hazkuntza-fasean zeuden. Balorazioak 1 eta 9 eskalatan hartu ziren, non gaixotasun arrastorik ez zuten landareak bederatzi eta guztiz puntuatu ziren. hildako landareak bat bezala sailkatu ziren.2017an bi balorazio egin ziren eta 2018an lau irakurketa urtero inokulatu eta bi astera hasita.sAUDPC (gaixotasunaren progresioaren kurbaren azpiko eremu estandarizatua) aurrez deskribatu bezala kalkulatu da.
Argitalpenaren ordua: 2021-04-01